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RNA分子診斷行業(yè)市場需求規(guī)模前景研究預(yù)測及發(fā)展競爭戰(zhàn)略規(guī)劃指導(dǎo)評估

日期: 2021-12-17
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RNA分子診斷行業(yè)市場需求規(guī)模前景研究預(yù)測及發(fā)展競爭戰(zhàn)略規(guī)劃指導(dǎo)評估

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RNA分子診斷行業(yè)技術(shù)發(fā)展情況:RNA分子診斷是以RNA為檢測靶標(biāo)的分子診斷新技術(shù),與傳統(tǒng)DNA分子診斷技術(shù)相比,靈敏度更高,特異性更強,可以廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測、血液篩查、食品安全檢測和傳染性疾病防控。

目前RNA的擴(kuò)增主要有兩種實現(xiàn)路徑,一種是基于逆轉(zhuǎn)錄聯(lián)合PCR擴(kuò)增(RT-PCR)的技術(shù),該技術(shù)在檢測RNA時會受DNA的干擾,特別是在原核生物中DNA和RNA的序列完全一致,需要先去除DNA再對RNA進(jìn)行擴(kuò)增檢測,而去除DNA的過程也不可避免會造成RNA的降解損失。另外一種是以SAT專利技術(shù)為代表的基于RNA逆轉(zhuǎn)錄后再進(jìn)行轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增的RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)。兩種技術(shù)平臺發(fā)展情況如下:

(1)RT-PCR技術(shù):RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)即逆轉(zhuǎn)錄PCR,也稱為反轉(zhuǎn)錄PCR,是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA(complementaryDNA,體外經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄后與RNA互補的DNA鏈)的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反應(yīng)(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用,從RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,進(jìn)行PCR反應(yīng)。當(dāng)RT-PCR反應(yīng)運用于分子診斷時,其檢測靶標(biāo)為RNA,擴(kuò)增產(chǎn)物為DNA,可以實現(xiàn)對RNA的檢測目的。

RT-PCR是基于PCR的技術(shù),PCR技術(shù)起源于1988年,技術(shù)上實現(xiàn)了在體外模擬發(fā)生于細(xì)胞內(nèi)的DNA快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列復(fù)制的過程,此后陸續(xù)衍生出很多不同的細(xì)分技術(shù),但基本原理類似。在中國,業(yè)內(nèi)一般所稱的PCR技術(shù)包括常規(guī)PCR(檢測DNA的技術(shù))和RT-PCR(檢測RNA的技術(shù)),為區(qū)分PCR技術(shù)在檢測DNA和RNA的不同應(yīng)用場景時,以常規(guī)PCR和RT-PCR技術(shù)分別指代二者。

目前國內(nèi)外主要廠商包括ThermoFisher、華大基因、達(dá)安基因、圣湘生物、之江生物、碩世生物等,已開發(fā)出將RT-PCR與實時熒光檢測相結(jié)合的實時熒光RT-PCR技術(shù)(ReverseTranscription-Real-timePolymeraseChainReaction),可將RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA后再作為模板進(jìn)行實時熒光PCR以進(jìn)行檢測,主要應(yīng)用于RNA病毒檢測等領(lǐng)域。

(2)RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù):RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)是一種用于放大擴(kuò)增特定的RNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),其主要技術(shù)原理是同一溫度下,首先通過反轉(zhuǎn)錄酶產(chǎn)生靶標(biāo)核酸(RNA)的一個雙鏈DNA拷貝,然后利用RNA多聚酶從該DNA拷貝上產(chǎn)生多個RNA拷貝;有時,每一個新產(chǎn)生的RNA拷貝還可以從反轉(zhuǎn)錄開始進(jìn)入下一個循環(huán);達(dá)到指數(shù)擴(kuò)增RNA的目的。該技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品最早于1995年在美國推出(transcriptionmediatedamplification,TMA,轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的恒溫擴(kuò)增技術(shù))。

1)TMA技術(shù):轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的恒溫擴(kuò)增技術(shù)(transcriptionmediatedamplification,TMA)是一種將RNA恒溫擴(kuò)增與雜交保護(hù)檢測(hybridizationprotectionassay,HPA)結(jié)合在一起的核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)。該技術(shù)是豪洛捷于90年代推出,具體原理為RNA在反轉(zhuǎn)錄酶(MMLV)的作用下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),形成RNA-DNA雜交分子。MMLV酶同時具有的RNaseH活性可水解雜交分子形成單鏈DNA,繼而形成雙鏈DNA,雙鏈DNA在T7RNA聚合酶作用下進(jìn)行轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)完成后,進(jìn)行HPA檢測,即在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入熒光探針與產(chǎn)物進(jìn)行雜交,雜交后再加入檢測液進(jìn)行發(fā)光檢測。美國豪洛捷公司從1995年到2012年開發(fā)的TMA檢測產(chǎn)品均是采用HPA技術(shù)進(jìn)行終點檢測,非實時熒光檢測。

2012年,豪洛捷于美國推出了實時熒光轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的恒溫擴(kuò)增產(chǎn)品,并于2019年在中國推出了類似產(chǎn)品,但與上海仁度生物科技股份有限公司技術(shù)相比,實現(xiàn)實時熒光檢測的原理不同。業(yè)內(nèi)通常用TMA技術(shù)統(tǒng)稱TMA技術(shù)(雜交保護(hù)檢測)和實時熒光轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的恒溫擴(kuò)增技術(shù),二者差異是前者為終點檢測,后者為實時熒光檢測。

2)SAT專利技術(shù):RNA實時熒光恒溫擴(kuò)增檢測技術(shù)(SimultaneousAmplificationandTesting),簡稱SAT專利技術(shù),是將RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)和實時熒光檢測技術(shù)相結(jié)合的一種新型核酸檢測技術(shù),并于2010年推出首批產(chǎn)品。SAT專利技術(shù)是上海仁度生物科技股份有限公司自主研發(fā)的專利技術(shù)。其主要技術(shù)原理是同一溫度下,首先通過M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶產(chǎn)生靶標(biāo)核酸(RNA)的一個雙鏈DNA拷貝,然后利用T7RNA多聚酶從該DNA拷貝上產(chǎn)生多個(100~1000個)RNA拷貝;每一個RNA拷貝再從反轉(zhuǎn)錄開始進(jìn)入下一個擴(kuò)增循環(huán);同時,帶有熒光標(biāo)記的探針和這些RNA拷貝特異結(jié)合,

產(chǎn)生熒光。該熒光信號可由熒光檢測儀器實時捕獲,實時反映擴(kuò)增循環(huán)情況。該技術(shù)是上海仁度生物科技股份有限公司擁有的核心技術(shù),相較于傳統(tǒng)的RT-PCR的檢測方式,擴(kuò)增效率更高,檢測時間更短;且針對RNA和DNA共存的樣本,檢測RNA具有不受基因組DNA的干擾,不需要去除DNA,減少RNA的損失,擴(kuò)增效率更高等優(yōu)點。因其高靈敏度、高特異性、低污染、反應(yīng)穩(wěn)定等特點,目前已應(yīng)用于病原體檢測、血液病毒篩查、環(huán)境微生物檢測等領(lǐng)域,具有廣闊的應(yīng)用前景。

3)T7RNA恒溫擴(kuò)增和多生物素信號放大相結(jié)合的雙擴(kuò)增技術(shù):T7RNA恒溫擴(kuò)增和多生物素信號放大相結(jié)合的雙擴(kuò)增技術(shù),是一種將RNA恒溫擴(kuò)增與多生物素信號放大相結(jié)合的核酸擴(kuò)增檢測技術(shù),武漢中幟于2015年推出該技術(shù)的首個產(chǎn)品。其技術(shù)具體原理為首先進(jìn)行RNA恒溫擴(kuò)增:RNA在轉(zhuǎn)錄酶和T7聚合酶的作用下,經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄,實現(xiàn)RNA恒溫擴(kuò)增。然后進(jìn)行多生物素信號放大檢測:擴(kuò)增后的RNA產(chǎn)物加入到包被有捕獲探針的微孔中進(jìn)行雜交,同時加入捕獲探針對應(yīng)的特異探針,微孔中的捕獲探針可與RNA產(chǎn)物結(jié)合使其錨定在微孔中,特異探針的一端可結(jié)合到RNA產(chǎn)物上,另一端與下一步加入的放大探針結(jié)合,實現(xiàn)信號放大過程,標(biāo)記有多生物素的放大探針隨后與酶聯(lián)物結(jié)合,最終形成捕獲探針-RNA擴(kuò)增產(chǎn)物-特異探針-放大探針-酶聯(lián)物復(fù)合體,最后加入化學(xué)發(fā)光底物,在化學(xué)發(fā)光儀上進(jìn)行檢測。該技術(shù)是恒溫擴(kuò)增的終點檢測技術(shù),與實時熒光檢測技術(shù)不相同。

(3)RT-PCR技術(shù)和各個RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)的比較情況:

1)RT-PCR技術(shù)和RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用情況:理論上,在實驗室環(huán)境下RT-PCR和RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)(以SAT技術(shù)為例)對于所有的RNA均可以進(jìn)行檢測,但是在臨床上,在部分領(lǐng)域RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)具有一定優(yōu)勢。

A、感染檢測領(lǐng)域:當(dāng)同一個病原體內(nèi)DNA和RNA同時存在時,在實驗室環(huán)境下,可以通過DNA酶等手段去除DNA后,采用RT-PCR檢測RNA。但在實際應(yīng)用中,去除DNA的同時會帶來RNA的降解,而且延長了檢測時間,因此,在DNA和RNA同時存在的情況下,RT-PCR技術(shù)檢測臨床應(yīng)用難度較高,目前該領(lǐng)域的RNA分子診斷主要為RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù);對于RNA病毒類型,由于基于PCR技的RT-PCR技術(shù)發(fā)展較早,市場認(rèn)可度較高,目前主要為RT-PCR技術(shù)。具體情況如下:

RNA分子診斷行業(yè)市場需求規(guī)模前景研究預(yù)測及發(fā)展競爭戰(zhàn)略規(guī)劃指導(dǎo)評估?

B、腫瘤檢測和其他領(lǐng)域的應(yīng)用前景:在腫瘤診斷、生育健康、遺傳病、伴隨診斷等領(lǐng)域,理論上,所有的RNA靶標(biāo)都可以采用SAT或RT-PCR檢測。類似于感染檢測領(lǐng)域,有些RNA靶標(biāo)的檢測需要排除DNA的干擾,由于染色體上同時存在對應(yīng)于RNA的DNA拷貝,如果用RT-PCR方法檢測,需要去除DNA,否則,會干擾RNA檢測;去除DNA的過程還會導(dǎo)致RNA損失,影響檢測靈敏度;但是SAT技術(shù)無需去除DNA的過程,可以直接檢測RNA。舉例來說,非編碼RNAMALAT1,是在非小細(xì)胞肺癌中一個非常重要的預(yù)后分子標(biāo)志物,但是這個RNA的序列與人基因組DNA上的序列完全一致,且具有不同的生物學(xué)意義,如果使用RT-PCR必須去除基因組DNA,否則會導(dǎo)致假陽性結(jié)果。因此,在這些情形下,SAT技術(shù)檢測優(yōu)勢明顯。

2)各個RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)的比較情況:境內(nèi)外企業(yè)所運用的RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)具體應(yīng)用情況的比較分析如下所示:總體而言,在RNA恒溫擴(kuò)增領(lǐng)域,雖然各家技術(shù)路徑不同,由于實時熒光檢測可以在保證較高自動化程度的同時能夠?qū)崿F(xiàn)精確定量,因此終點檢測技術(shù)正在被實時熒光檢測所取代。上海仁度生物科技股份有限公司的SAT專利技術(shù),在國內(nèi)最早推出實時熒光RNA恒溫擴(kuò)增檢測技術(shù)產(chǎn)品(2010年),目前已獲證的實時熒光檢測產(chǎn)品種類最多,因此,在國內(nèi)市場相較于其他技術(shù)路線而言,具備起步時間早、產(chǎn)品線豐富等競爭優(yōu)勢。

3)RT-PCR和各個RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)的市場份額從國內(nèi)感染病原體RNA分子診斷總體市場來看,RT-PCR技術(shù)的市場規(guī)模自2015年的4.6億元增長至2019年13.2億元,是該市場的主流技術(shù);RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)的市場規(guī)模自2015年的0.1億元增長至2019年2.9億元,所占市場份額自1.9%上升至18.0%。

國內(nèi)感染病原體RNA分子診斷市場,區(qū)分病原體類別,在RNA病毒(僅含有RNA)領(lǐng)域,RT-PCR占據(jù)主流市場地位,在2019年占比為93.8%,RNA恒溫擴(kuò)增合計占比為6.2%;在細(xì)菌、真菌、支原體、衣原體、DNA病毒(同一個病原體同時存在DNA和RNA)等病原體的RNA分子診斷領(lǐng)域,RT-PCR技術(shù)目前沒有獲證的國產(chǎn)產(chǎn)品,該類別的RNA分子診斷市場均為RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù),可從NMPA官網(wǎng)注冊證信息獲得佐證。

在各RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)之中,上海仁度生物科技股份有限公司SAT技術(shù)的市場規(guī)模自2015年的0.09億元增長至2019年1.0億元,所占市場份額達(dá)到34.8%;豪洛捷TMA技術(shù)(包括終點檢測法和實時熒光法)在2019年的市場規(guī)模同樣約1.0億元,所占市場份額為34.8%;武漢中幟T7RNA恒溫擴(kuò)增和多生物素信號放大相結(jié)合的雙擴(kuò)增技術(shù)的國內(nèi)市場規(guī)模在2019年為0.3億元,所占市場份額為10.5%。

(4)RNA分子診斷行業(yè)技術(shù)發(fā)展趨勢:

1)新的RNA檢測靶點越來越多:根據(jù)“DNA-RNA-蛋白質(zhì)”的分子生物學(xué)遺傳物質(zhì)表達(dá)的中心法則,RNA分子一直被認(rèn)為是遺傳信息和執(zhí)行具體功能的蛋白質(zhì)之間的一個重要過渡。最近,越來越多的證據(jù)已清楚地表明,與經(jīng)過多年研究的DNA認(rèn)識不同,目前對RNA的認(rèn)識只是冰山一角,已經(jīng)被應(yīng)用于臨床靶點更是屈指可數(shù)。隨著越來越多的新的RNA靶點被發(fā)現(xiàn),目前很多使用DNA或蛋白質(zhì)為檢測靶點的產(chǎn)品,包括感染、腫瘤、伴隨診斷、遺傳病、食品安全等領(lǐng)域,都將會被RNA靶點所取代。

2)RNA分子診斷在部分領(lǐng)域優(yōu)勢凸顯:以SAT為代表的RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)目前已成功地應(yīng)用于沙眼衣原體、淋病奈瑟菌、解脲脲原體、生殖支原體、結(jié)核分枝桿菌、肺炎支原體、腸道病毒以及甲流病毒等多種臨床檢測。RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)可降低擴(kuò)增產(chǎn)物污染風(fēng)險,可以檢測包括尿液在內(nèi)的多種樣本,無需抽血穿刺,可實現(xiàn)無創(chuàng)檢測,也解決了RT-PCR技術(shù)中檢測準(zhǔn)確性的問題。另外,由于RNA只存在于活的細(xì)菌中,而病原體死亡后DNA仍然能夠穩(wěn)定存在幾周甚至更久的時間,因此可以通過RNA檢測結(jié)果更精準(zhǔn)地判斷患者是否治愈,避免臨床上抗生素的過度使用。在感染疾病檢測領(lǐng)域,以SAT專利技術(shù)為代表的RNA恒溫擴(kuò)增技術(shù)優(yōu)勢逐漸明顯。

3)儀器一體化、自動化趨勢:隨著老齡化人口增長及公眾醫(yī)療需求的不斷提升,實驗室也面臨著檢測量不斷增加、技術(shù)人員短缺的壓力,同時由于分子診斷操作步驟多,對實驗室環(huán)境和操作人員的專業(yè)性、技術(shù)性要求都很高,儀器一體化、自動化可以較好的解決這些難題。面對未來可能持續(xù)日益增長的分子診斷需求,由于SAT采用了恒溫擴(kuò)增技術(shù),比RT-PCR更容易實現(xiàn)一體化、自動化,可以協(xié)助實驗室工作人員高效、安全地完成大規(guī)模檢測任務(wù),提高檢測效率,RNA分子診斷整體向著整合化、全自動一體化的方向發(fā)展。

中金企信國際咨詢公布的《2022-2028年中國RNA分子診斷行業(yè)市場全景調(diào)研分析及投資可行性研究預(yù)測報告

(5)上海仁度生物科技股份有限公司的技術(shù)路徑順應(yīng)行業(yè)發(fā)展趨勢:

上海仁度生物科技股份有限公司選擇RNA分子診斷技術(shù)路徑,在感染病原體檢測領(lǐng)域中的生殖道、呼吸道(結(jié)核分枝桿菌、肺炎支原體)和乙肝RNA檢測領(lǐng)域,上海仁度生物科技股份有限公司的SAT產(chǎn)品上市之前,國內(nèi)已上市的病原體檢測的核酸產(chǎn)品均以檢測DNA為靶標(biāo)(PCR法)。上海仁度生物科技股份有限公司在國內(nèi),最早推出生殖道(沙眼衣原體、淋病奈瑟菌、解脲脲原體、生殖支原體)、呼吸道(結(jié)核分枝桿菌、肺炎支原體)和乙肝檢測領(lǐng)域以RNA為檢測靶標(biāo)的核酸檢測試劑產(chǎn)品,后續(xù)各類型分子診斷試劑產(chǎn)品的研發(fā)均基于其SAT專利技術(shù)平臺;而且上海仁度生物科技股份有限公司自主研發(fā)的全自動核酸檢測分析系統(tǒng)(AutoSAT)是首臺國產(chǎn)全自動、高通量、具有隨到隨檢和急診功能的RNA分子檢測流水線,可搭載RNA實時熒光恒溫擴(kuò)增技術(shù)平臺(SAT)的全系列試劑產(chǎn)品,實現(xiàn)了分子診斷隨到隨檢,滿足門急診快速、精準(zhǔn)的檢測需求。

上海仁度生物科技股份有限公司的SAT技術(shù),順應(yīng)RNA分子診斷行業(yè)“新的RNA檢測靶點越來越多、RNA分子診斷在部分領(lǐng)域優(yōu)勢凸顯、儀器一體化、自動化趨勢”的發(fā)展趨勢,上海仁度生物科技股份有限公司的SAT技術(shù)已被寫入眾多生殖、呼吸專家共識與診斷指南推薦目錄。由于專家共識與診斷推薦指南系醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)匯聚行業(yè)共同觀點或具體臨床問題診療方案的權(quán)威性文件,在相當(dāng)程度上肯定了過去一定時期內(nèi)具體醫(yī)療診斷領(lǐng)域的診療手段與臨床方法,并對未來的診療手段與臨床方法具備權(quán)威指導(dǎo)意義,是上海仁度生物科技股份有限公司技術(shù)路線符合所處行業(yè)未來發(fā)展趨勢的客觀依據(jù),具體情況如下:

以上海仁度生物科技股份有限公司生殖道產(chǎn)品系列為例,其沙眼衣原體核酸檢測試劑盒(RNA恒溫擴(kuò)增)對應(yīng)的行業(yè)專家共識《非淋菌性尿道炎病原學(xué)診斷專家共識(2016)》中存在針對RNA檢測與SAT技術(shù)的如下表述:“目前檢測CT最好的方法是RNA檢測。RNA檢測主要包括SAT(simultaneousamplificationandtesting,SAT)和TMA(transcription-mediatedamplification,TMA)技術(shù),這兩種技術(shù)的擴(kuò)增儀原理完全相同。由于RNA在非病毒性病原體微生物細(xì)胞中存在多拷貝(其16SrRNA在每個細(xì)胞中多達(dá)10^4拷貝),與以DNA為靶標(biāo)的PCR等技術(shù)相比,其靈敏度和準(zhǔn)確性更高,并且可以檢測包括尿液在內(nèi)的各種樣本,且不同部位的樣本結(jié)果一致性很好。研究表明,在男性患者中,尿液和尿道拭子RNA檢測結(jié)果的一致性幾乎可達(dá)100%。另外,由于RNA只存在于活的細(xì)菌中,所以RNA檢測結(jié)果可以用于療效判斷,符合目前精準(zhǔn)醫(yī)療的要求,是目前為止最好的檢測方法。”

此外,在診斷指南《梅毒、淋病和生殖道沙眼衣原體感染診療指南(2020年)》同樣存在包括“核酸檢測:PCR、RNA實時熒光核酸恒溫擴(kuò)增法、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)核酸恒溫擴(kuò)增法等檢測男性尿道拭子、女性宮頸管拭子或男女性尿液標(biāo)本沙眼衣原體核酸陽性。核酸檢測應(yīng)在通過相關(guān)機構(gòu)認(rèn)定的實驗室開展?!钡南嚓P(guān)表述。以上海仁度生物科技股份有限公司呼吸道產(chǎn)品系列為例,其肺炎支原體核酸檢測試劑盒(RNA恒溫擴(kuò)增)對應(yīng)的行業(yè)專家共識《兒童肺炎支原體呼吸道感染實驗室診斷中國專家共識(2019)》亦存在與SAT技術(shù)的相關(guān)表述:“RNA檢測技術(shù):RNA檢測技術(shù)是基于核酸恒溫擴(kuò)增技術(shù)和實時熒光檢測技術(shù)相結(jié)合的一種核酸檢測方法,簡稱實時熒光恒溫擴(kuò)增技術(shù)(simultaneousamplificationandtesting,SAT)。其采用的靶標(biāo)為16SrRNA,在Mp中以多拷貝形式存在(多達(dá)10^4拷貝量),其靈敏度和準(zhǔn)確性與DNA檢測方法相比都有很大提高。由于RNA隨病原體死亡而降解,可作為評價Mp感染轉(zhuǎn)歸、藥物療效的指標(biāo),其檢測結(jié)果與Mp的感染嚴(yán)重程度相關(guān)性較好,因此Mp的RNA檢測是目前早期快速診斷、判斷療效的最好方法之一。


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